转化后PCR无条带
把连接产物连接到T载体之后转化大肠杆菌，用连接产物片段上有而T载体上没有的Kana抗性进行筛选，有转化子长出。培养转化子后PCR，却扩增不出目的条带（即之前的连接产物，约...
把连接产物连接到T载体之后转化大肠杆菌，用连接产物片段上有而T载体上没有的Kana抗性进行筛选，有转化子长出。培养转化子后PCR，却扩增不出目的条带（即之前的连接产物，约3kb）。这是为什么？百思不得其解啊…
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T载体是克隆载体而不是表达载体，你克隆上去的片段不一定能表达啊。而你长出来的菌落可能是一些杂的菌落，比如抗生素失效。
其实T载体可以做兰白斑筛选的，一般的T载体阳性率很高的，可达到90%
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GRS塑料
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按照你的意思，插入序列是抗卡那霉素的基因，不知道我的理解是否正确。插入的序列应该表达量很小，所以不能作为筛选的标准，你的T载体原本是带什么抗性的？通常是Amp的，建议你用Amp来筛选
追问
但是如果用T-vector上面的Amp抗性筛选的话，岂不是会有很多假阳性？之所以用插入序列上的Kana抗性来筛选，就是为了避免假阳性。结果有了转化子，却扩增不出应有大小的条带.....不知道是为什么......
追答
你插入的序列没用凝胶回收试剂盒纯化一下吗？纯化过的片段再连接90%是真阳性，我认为i卡那霉素抗性基因是没法表达的，离启动子太远了
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