Question

DNA电泳常见问题分析

DNA电泳得到的区带和模糊的原因,有点急 拜托了

Answer 1

DNA电泳常见问题分析
问题
原因
解决办法
DNA带模糊
1)
DNA降解
避免核酸酶污染
2)
电泳缓冲液陈旧
电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pH值上升，缓冲能力减弱，从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液
3)
所用电泳条件不合适
电泳时电压不应超过20V/cm，温度＜30℃;巨大DNA链电泳，温度应＜15℃;核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力
4)
DNA上样量过多
减少凝搭带蚂胶中DNA上样量
5)
DNA样含盐过高
电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐
6)
有蛋白污染
电泳前酚抽提去除蛋白
7)
DNA变性
电泳前勿加热，用20mM
NaCl缓冲液稀释DNA
不规则DNA带迁移
1)
对于λ/Hind
III片段cos位点复性
电泳前于65℃加热DNA
5分钟，然后在冰上冷却5分钟
2)
电泳条件不合适
电泳电压不超过20V/cm;温度＜30℃;经常更换电泳缓冲液
3)
DNA变性
以20mM
NaCl
Buffer稀释DNA，电泳前勿加热
带弱或无DNA带
1)
DNA的上样量不够
增加DNA的上样量;聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳灵敏度稍高，上样量可适当降低
2)
DNA降解
避免DNA的核酸酶污染
3)
DNA走出凝胶
缩短电泳时间，降低电压，增强凝胶知埋浓度行核
4)
对于EB染色的DNA，所用光源不合适
应用短波长(254nm)的紫外光源
DNA带缺失
1)
小DNA带走出凝胶
缩短电泳时间，降低电压，增强凝胶浓度
2)
分子大小相近的DNA带不易分辨
增加电泳时间，核准正确的凝胶浓度
3)
DNA
变性
电泳前请勿高温加热DNA链，以20mM
NaCl
Buffer稀释DNA
4)
DNA链巨大，常规凝胶电泳不合适
在脉冲凝胶电泳上分析