Question

PCR的反应包括三个主要步骤

Answer 1

PCR由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成：

1、模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；

2、模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；

3、延伸：DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。

传统的Taq估计合成1000bp大概需要1分钟、较新的Tbr（来自于嗜热菌Thermus brockianus）约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。有修正功能的则会比较慢。

扩展资料：

实例

优化聚合酶链式反应:

在实践中，聚合酶链式反应可以因各种原因而失败，部分原因是由于其对于污染的敏感性，导致扩增错误的DNA产物。正因为如此，人们已经开发了一些技术和步骤来优化聚合酶链式反应条件。将聚合酶链式反应前的混合物与潜在DNA污染物分开的实验室方案和流程解决了外源DNA的污染问题。

这通常包括从用于分析的区域分理出聚合酶链式反应的设定区域或者说聚合酶链式反应产物的纯化，一次性塑料制品的使用，及对反应装置之间的工作台面彻底清洁。引物的设计技术在改善聚合酶链式反应产物产率和避免杂产物的形成是很重要的。

替代缓冲成分和聚合酶的使用有助于较长或存在其他问题的DNA区域的扩增。在缓冲体系中加入试剂，如甲酰胺，或会增加聚合酶链式反应的特异性和产量。可以利用计算机模拟理论聚合酶链式反应结果（电子聚合酶链式反应），以协助在引物设计。

参考资料：百度百科-聚合酶链式反应

Answer 2

1、变性：目的双链DNA片段在94℃下解链；
2、退火：两种寡核苷酸引物在适当温度（50℃左右）下与模板上的目的序列通过氢键配对；
3、延伸：在TaqDNA聚合酶合成DNA的最适温度下以目的DNA为模板进行合成。

Answer 3

变性，退火，延伸

Answer 4

变性、退火、延伸

Answer 5

1、变性：目的双链DNA片段在94℃或高温下解链为单链；
2、退火：目的基因片片段的5‘，3’端的引物在适当温度（一般为引物Tm值+5℃提高扩增的特异性）下与模板上的目的基因的5‘，3’端给合；
3、延伸：在TaqDNA聚合酶的作用下和引物的引导下将PCR反应体系中的A，G，T，C给合到模板上去，完成DNA片段的复制。产生一条新的DNA片段