Question

sfiⅠ酶切位点的保护性碱基如何添加

Answer 1

要求不是很严格吧，随机添加就可以了，鉴于含有GGCC，可以多加TA。因为基因序列内部的酶切位点，两侧的序列也没有严格的要求，只要Re有停留的位置就可以了，个人觉得。

Answer 2

人为引物需要导入酶切位点最终是用来切开的，但由于PCR扩后位点太边缘，切不开，PCR引物一般用DNA，用核苷酸转移酶即可（DNA液相合成），注意嘌呤嘧啶比例。

追问

能不能具体说下添加什么碱基 谢啦

追答

一个GGGGG 另一个与之互补CCCCC，它们之间是三键，较牢固，，至为什么是五个，这不一定，也许前人经验认为长度刚好吧。有空再写具体点，希望对你有用。