用革兰氏阳性菌做菌落PCR时，怎样处理菌体
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2017-04-10 · 专注各类elisa试剂盒、血清抗体
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抽出来的模板你可以用好多次.煮沸法模板有效期短,提取的效率也很低下,干扰PCR的杂质也多.就像你PCR失败一样,不一定是模板中没有DNA,也可能是杂质干扰的结果.
如果样本只是一个菌,或者不是很多,建议少量提取基因组,这样的模板是不会有问题的.至少,包括我在内我所有见过的做过这个实验的人都没有失败过.
如果样本很多,非得要煮沸法的话你这样做：
不要用PCR仪95℃处理,用液体培养基离心获得菌体,除去培养基,无菌水悬浮,沸水浴30min,迅速-20℃冰冻,化冻后8000rpm离心以沉淀细胞碎片,取2μL上清作为PCR模板.
如果你非要用PCR仪处理,也行,37℃溶菌酶预处理30min.
如果我说的你都不想做,那么请把你的模板用量减少到2μL（我指的是对于50μLPCR体系来说）,说不定是杂质太多导致你PCR失败.
如果样本只是一个菌,或者不是很多,建议少量提取基因组,这样的模板是不会有问题的.至少,包括我在内我所有见过的做过这个实验的人都没有失败过.
如果样本很多,非得要煮沸法的话你这样做：
不要用PCR仪95℃处理,用液体培养基离心获得菌体,除去培养基,无菌水悬浮,沸水浴30min,迅速-20℃冰冻,化冻后8000rpm离心以沉淀细胞碎片,取2μL上清作为PCR模板.
如果你非要用PCR仪处理,也行,37℃溶菌酶预处理30min.
如果我说的你都不想做,那么请把你的模板用量减少到2μL（我指的是对于50μLPCR体系来说）,说不定是杂质太多导致你PCR失败.
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