Question

rt pcr的原理及步骤

rt pcr的原理及步骤是什么？

Answer 1

原理：RT-PCR 为反转录RCR（reverse transcription PCR）和实时PCR（real timePCR）共同的缩写.逆转录PCR,或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形.在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增.
步骤：（一）预变性：　
破坏DNA中可能存在的较难破坏的二级结构.使DNA充分变性,减少DNA 复杂结构对扩增的影响,以利于引物更好的和模板结合,特别是对于基因组来源的DNA模板,最好不要吝啬这个步骤.此外,在一些使用热启动Taq酶的反应中,还可激活Taq酶,从而使PCR反应得以顺利进行.
（二）变性--退火--延伸循环：　　
①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备； 　　
②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；　　
③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链.（三）PCR仪扩增循环后72度延伸10分钟。

追问

你回答得很仔细，我想请问一下国内有哪家做PCR试剂是做的比较好的。听人家说广州的往圣科技做的不错。

Answer 2

RT-PCR 就是逆转录 PCR（reverse transcription PCR）或者称反转录 PCR（reverse transcription-PCR, RT-PCR），是聚合酶链式反应（PCR）的一种广泛应用的变形。在 RT-PCR 中，一条 RNA 链被逆转录成为互补 DNA，再以此为模板通过 PCR 进行 DNA 扩增。PCR扩增，在扩增的指数期对起始模板进行定量，在扩增过程中，荧光信号随着PCR产物的增加而增强。我们实验室使用的BIOGHSC Super Probe Kit PCR实验检测DNA,测得的循环数在28左右，整个PCR过程有4个阶段，基线期---指数增长期---线性增长期---平台期，指数增长期内，PCR有高度重复性，一般的检测指标是看线性图谱的扩增曲线的起跳值（CT值）。