Question

普通pcr引物设计和荧光定量pcr引物设计的区别

Answer 1

一、方法不同

1、普通pcr引物设计：引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。

2、荧光定量pcr引物设计：通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，标记跟踪PCR产物进行实时监测反应，利用与之相适应的软件对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度

二、原理不同

1、普通pcr引物设计：为了找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板DNA序列。

2、荧光定量pcr引物设计：在PCR反应体系中加入荧光基团，通过荧光信号不断累积而实现实时监测PCR全程，然后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。在实时荧光定量PCR中，对全程PCR扩增过程进行实时检测，根据反应时间和荧光信号的变化可以绘制成一条曲线。

三、注意事项不同

1、普通pcr引物设计：引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。产物不能形成二级结构。引物长度在15~30碱基之间。

2、荧光定量pcr引物设计：实时荧光定量 PCR 仪应安放在湿度较低、灰尘较少、远离水池的平稳台面上，不能有强光直射，室内应通风良好，无腐蚀性气体 

参考资料来源：百度百科-荧光定量PCR

参考资料来源：百度百科-PCR引物设计

Answer 2

实时定量的引物设计要求比较高，可以按普通引物设计的方法来做，但是设计时要注意扩增的片段不能太大，最好在250bp-100bp之间。同时要保证这对引物有绝对的特异性，因为要是产生非特异性扩增的话，就不能准确的计量模板量了，这样就失去了实时定...

Answer 3

NF-KBmRNA不就是NF-KB的mRNA么 做定量PCR就是测它mRNA的表达量啊 NF-KBP65是NF-KB3 NF-KBP52是NF-KB2 所以这两个还是有区别的 如果你是要检测65的话

Answer 4

建议你还是选择CDS区不一样的地方设计引物吧，这样可以避免交叉污染引起的非特异扩增，扩增的序列长度不一定要一样，每个引物你最好设计两三对，然后做一个相对定量看看不同引物的扩增效率，选择比较好的两对引物做后续试验，内参基因的引物不需...

Answer 5

实时定量的引物设计要求比较高，可以按普通引物设计的方法来做，但是设计时要注意扩增的片段不能太大，最好在250bp-100bp之间。同时要保证这对引物有绝对的特异性，因为要是产生非特异性扩增的话，就不能准确的计量模板量了，这样就失去了实时定...